วิธีการตรวจยูเรียในเลือดซีรั่ม ความสำคัญทางคลินิกของการตรวจยูเรีย การหาปริมาณยูเรียในเลือดและปัสสาวะด้วย diacetyl monooxime

วิธีการแกสโตรเมตริก

อีกชื่อหนึ่งของการวิจัยคือการวิเคราะห์ไฮโปโบรไมต์ของความเข้มข้นของยูเรีย แนวคิดของวิธีการนี้คือการใช้ปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและการสลายตัวของยูเรียผ่านไฮโปโบรไมต์ ปฏิกิริยาจะปล่อยไนโตรเจนและคาร์บอนไดออกไซด์ออกมา ส่วนประกอบสุดท้ายจะถูกกำจัดออกด้วยสารละลายพิเศษหลังจากนั้นจะคำนวณปริมาณไนโตรเจน

กลุ่มวิธีการหลักในการกำหนดปริมาณยูเรียแบ่งออกเป็น:

1. แซนธ์ไฮโดรล: แซนธ์ไฮโดรลเฮเทอโรไซคลิกแอลกอฮอล์ทำปฏิกิริยากับยูเรียเพื่อสร้างไดแซนทิลยูเรียที่ไม่ละลายน้ำ ซึ่งถูกกำหนดเพิ่มเติมด้วยวิธีกราวิเมตริก เนฟีโลเมตริก เชิงสี หรือไทไตรเมทริก วิธีการมีความแม่นยำแต่ต้องใช้แรงงานมาก
2. ไฮโปคลอไรต์ –วิธีการของ B.A. Rashkovan ซึ่งประกอบด้วยลักษณะของสีที่มีลักษณะเฉพาะระหว่างปฏิกิริยาของยูเรียกับโซเดียมไฮโปคลอไรต์และฟีนอลนั้นไม่ได้ถูกนำมาใช้จริงเนื่องจากเฉดสีที่แตกต่างกันของตัวอย่างการทดลองและการควบคุมและการปรากฏตัวของความขุ่นบ่อยครั้งเมื่อเติม HCl .
3. ไดอะซิทิล โมโนไซม์วิธีการจะขึ้นอยู่กับปฏิกิริยา Firon ซึ่งเป็นปฏิกิริยาของยูเรียและไดอะซิติลโมโนไซม์กับการก่อตัวของผลิตภัณฑ์ที่มีสี โดยมีลักษณะเฉพาะคือสามารถทำซ้ำได้ดี มีความไวสูง และมีความจำเพาะสูง
4. วิธีกึ่งปริมาณโดยใช้กระดาษบ่งชี้
5. วิธีการใช้ อิเล็กโทรดคัดเลือกไอออน.
6. วิธีการใช้เอนไซม์จะขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสของยูเรียด้วยยูเรีย (pH ที่เหมาะสมคือ 6.0-8.0) แอมโมเนียที่ได้จะถูกกำหนดโดยใช้ปฏิกิริยาต่างๆ (ฟีนอลไฮโปคลอไรต์, กลูตาเมตดีไฮโดรจีเนส, ซาลิไซเลต-ไฮโปคลอไรต์)
7. แกสโตรเมตริก(ไฮโปโบรไมต์) ขึ้นอยู่กับการเกิดออกซิเดชันและการสลายตัวของยูเรียด้วยโซเดียมไฮโปโบรไมต์ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่าง:

CO 2 (NH 2) + 3NaBrO → N 2 + CO 2 + 3NaBr + H 2 O

คาร์บอนไดออกไซด์ที่ปล่อยออกมาจะถูกดูดซับโดยสารละลาย เหลือเพียงไนโตรเจนที่ปราศจากไนโตรเจน ซึ่งเป็นปริมาตรที่วัดได้ วิธีการนี้ไม่จำเพาะเจาะจง (เนื่องจากไฮโปโบรไมต์ไม่เพียงทำปฏิกิริยากับยูเรียเท่านั้น แต่ยังทำปฏิกิริยากับสารอื่นๆ ที่มีหมู่อะมิโนด้วย) เป็นวิธีที่ไม่ถูกต้อง ทำซ้ำได้ไม่ดี และใช้แรงงานมาก

เช่น ปึกแผ่นวิธีการตรวจวัดยูเรียได้รับการอนุมัติ: วิธีฟีนอลไฮโปคลอไรต์ วิธีไดอะซิติลโมโนไซม์และยูรีเอส และวิธีการด่วนโดยใช้กระดาษบ่งชี้ Ureatest

การหาปริมาณยูเรียในเลือดและปัสสาวะด้วย diacetyl monooxime

วิธีการของกลุ่มนี้ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยา Fearon ซึ่งเกิดขึ้นในสองขั้นตอน ขั้นตอนแรกคือการไฮโดรไลซิสของ diacetyl monooxime เพื่อสร้าง diacetyl และ hydroxylamine ในขั้นตอนที่สอง ไฮดรอกซิลามีนทำปฏิกิริยากับยูเรียเพื่อสร้างอนุพันธ์ไดอะซีนที่มีสี สำหรับการเกิดออกซิเดชันของไฮดรอกซีลามีนสามารถใช้สิ่งต่อไปนี้: โซเดียมเปอร์ซัลเฟต, กรดสารหนู, กรดเปอร์คลอริก, ฟีนาโซน, ไพเพอร์ เพื่อเพิ่มความเข้มข้นของสีและความคงตัวของสีจึงมีการใช้สิ่งต่อไปนี้: ไธโอเซมิคาร์บาไซด์, กรดฟีนิลแลนทรานิลิก, กลูคูโรโนแลคโตน, แคตไอออน, ทริปโตเฟน, ไนไตรต์

การหาปริมาณยูเรียโดยวิธียูรีเอส

วิธีการใช้เอนไซม์จะขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสของยูเรียด้วยยูเรียในตัวกลางบ่มที่มีค่า pH = 6.0-6.5 (บัฟเฟอร์ EDTA) หรือ pH = 6.9-7.0 (บัฟเฟอร์ฟอสเฟต) ให้เป็นคาร์บอนไดออกไซด์และแอมโมเนีย แอมโมเนียที่ได้สามารถกำหนดได้จากปฏิกิริยาที่มีความไวสูงและจำเพาะกับฟีนอลไฮโปคลอไรต์และตัวเร่งปฏิกิริยาไนโตรปรัสไซด์ โดยปฏิกิริยาซาลิไซเลต-ไฮโปคลอไรต์ โดยปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ของ Nessler (มีความไวน้อยกว่า 10 เท่าเมื่อเทียบกับฟีนอลไฮโปคลอไรต์ มีความจำเพาะต่ำ) โดยปฏิกิริยาไดคลอโรไอโซไซยานูเรต (การมีโปรตีนรบกวนการกำหนด)

ค่าปกติ

หากจำเป็นต้องเปรียบเทียบความเข้มข้นของไนโตรเจนที่ตกค้างกับปริมาณไนโตรเจนของยูเรีย ความเข้มข้นของไนโตรเจนหลังควรหารด้วย 2.14

ปัจจัยที่มีอิทธิพล

• ในร่างกาย: เพิ่มขึ้น - ยาพิษต่อไต, คอร์ติโคสเตียรอยด์, ไทรอกซีนส่วนเกิน; ลดลง - เพิ่มความเข้มข้นของฮอร์โมนโซมาโตโทรปิก
• ในหลอดทดลอง: รีดักชัน (วิธียูรีเอส) – โซเดียมซิเตรต

คุณค่าทางคลินิกและการวินิจฉัย

เซรั่ม

ระดับของยูเรียขึ้นอยู่กับอัตราการสังเคราะห์ในตับและการขับถ่ายออกทางไต รวมถึงปริมาณของแคแทบอลิซึมของโปรตีน

ระดับยูเรียที่เพิ่มขึ้นอาจเกิดขึ้นกับการทำงานของไตบกพร่อง (โรคเฉียบพลันและเรื้อรัง การอุดตันของทางเดินปัสสาวะ) การไหลเวียนของเลือดในไตบกพร่อง (ภาวะหัวใจล้มเหลว) น้ำในร่างกายลดลง (อาเจียน ท้องร่วง ขับปัสสาวะหรือเหงื่อออกเพิ่มขึ้น) การเร่งปฏิกิริยาของโปรตีนเพิ่มขึ้น (กล้ามเนื้อหัวใจตายเฉียบพลัน กล้ามเนื้อหัวใจตาย ความเครียด แผลไหม้ ตับลีบเหลือง เลือดออกในทางเดินอาหาร) โดยรับประทานอาหารที่มีโปรตีนสูง ในกรณีที่ร้ายแรงของภาวะไตวายเฉียบพลัน จะตรวจพบระดับยูเรียเพิ่มขึ้น 10 เท่า เนื่องจากการทำงานของไตขับน้ำกลับคืนเร็วกว่าความสามารถในการมีสมาธิ การขับถ่ายยูเรียในปัสสาวะตามปกติจึงเกิดขึ้นช้ากว่าการฟื้นฟูการขับปัสสาวะมาก

การลดลงเกิดขึ้นจากการรับประทานอาหารที่มีโปรตีนต่ำโดยมีการใช้โปรตีนเพิ่มขึ้นในเนื้อเยื่อ (การตั้งครรภ์ช่วงปลาย) โรคตับที่รุนแรงพร้อมกับการสังเคราะห์ยูเรียที่บกพร่อง (โรคดีซ่านในเนื้อเยื่อ, โรคตับแข็งในตับ)

ปัสสาวะ

การเพิ่มขึ้นของปริมาณยูเรียในปัสสาวะมีความเกี่ยวข้องกับภาวะต่อมไทรอยด์ทำงานเกิน, โรคโลหิตจางที่เป็นอันตราย, ไข้, พิษฟอสฟอรัส, สังเกตจากการรับประทานอาหารที่มีโปรตีนสูงและในช่วงหลังการผ่าตัด

การลดลงนี้สังเกตได้ในผู้ป่วยที่เป็นโรคไตอักเสบและโรคไตอื่นๆ ยูเรเมีย โรคดีซ่านในเนื้อเยื่อ โรคตับแข็ง หรือโรคตับเสื่อม รวมถึงในเด็กที่กำลังเติบโตอย่างมีสุขภาพดีและอาหารที่มีโปรตีนต่ำ

ยูเรีย(หรือเรียกอีกอย่างว่ายูเรีย) เป็นสารประกอบอินทรีย์ที่มีสูตร CO(NH 2) 2 (กรดคาร์บอนิกไดเอไมด์) ยูเรียไนโตรเจนคิดเป็นประมาณ 90% ของไนโตรเจนทั้งหมดที่ถูกขับออกมา

วิธีการหาปริมาณยูเรีย

กลุ่มวิธีการหลักในการกำหนดปริมาณยูเรียแบ่งออกเป็น:

• แซนไฮดรอล: แซนธ์ไฮโดรลเฮเทอโรไซคลิกแอลกอฮอล์ทำปฏิกิริยากับยูเรียเพื่อสร้างไดแซนทิลยูเรียที่ไม่ละลายน้ำ ซึ่งถูกกำหนดเพิ่มเติมด้วยวิธีกราวิเมตริก เนฟีโลเมตริก เชิงสี หรือไทไตรเมทริก วิธีการมีความแม่นยำแต่ต้องใช้แรงงานมาก
• ไฮโปคลอไรต์ - วิธีการของ B. A. Rashkovan ซึ่งประกอบด้วยลักษณะของสีที่มีลักษณะเฉพาะเมื่อยูเรียทำปฏิกิริยากับโซเดียมไฮโปคลอไรต์และฟีนอลไม่ได้ถูกนำมาใช้จริงเนื่องจากเฉดสีที่แตกต่างกันของตัวอย่างการทดลองและการควบคุมและการปรากฏตัวของความขุ่นบ่อยครั้งเมื่อเติม HCl
• วิธี Diacetyl Monooxime ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยา Firon ซึ่งเป็นอันตรกิริยาของยูเรียและ Diacetyl Monooxime กับการก่อตัวของผลิตภัณฑ์ที่มีสี โดยมีลักษณะเฉพาะคือสามารถทำซ้ำได้ดี มีความไวสูง และมีความจำเพาะสูง
• วิธีกึ่งปริมาณโดยใช้กระดาษบ่งชี้
• วิธีการใช้อิเล็กโทรดคัดเลือกไอออน
• วิธีการใช้เอนไซม์จะขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสของยูเรียด้วยยูเรีย (pH ที่เหมาะสมคือ 6.0-8.0) แอมโมเนียที่ได้จะถูกกำหนดโดยใช้ปฏิกิริยาต่างๆ (ฟีนอลไฮโปคลอไรต์, กลูตาเมตดีไฮโดรจีเนส, ซาลิไซเลต-ไฮโปคลอไรต์)
• Gasometric (ไฮโปโบรไมต์) ขึ้นอยู่กับการเกิดออกซิเดชันและการสลายตัวของยูเรียด้วยโซเดียมไฮโปโบรไมต์ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่าง:

CO 2 (NH 2) + 3NaBrO → N 2 + CO 2 + 3NaBr + H 2 O

คาร์บอนไดออกไซด์ที่ปล่อยออกมาจะถูกดูดซับโดยสารละลาย เหลือเพียงไนโตรเจนที่ปราศจากไนโตรเจน ซึ่งเป็นปริมาตรที่วัดได้ วิธีการนี้ไม่จำเพาะเจาะจง (เนื่องจากไฮโปโบรไมต์ไม่เพียงทำปฏิกิริยากับยูเรียเท่านั้น แต่ยังทำปฏิกิริยากับสารอื่นๆ ที่มีหมู่อะมิโนด้วย) เป็นวิธีที่ไม่ถูกต้อง ทำซ้ำได้ไม่ดี และใช้แรงงานมาก

วิธีฟีนอลไฮโปคลอไรต์, ไดอะซิติลโมโนไซม์ และยูรีเอส ตลอดจนวิธีด่วนโดยใช้กระดาษบ่งชี้ Ureatest ได้รับการอนุมัติให้เป็นวิธีการแบบครบวงจรสำหรับการตรวจวัดยูเรีย

การหาปริมาณยูเรียในเลือดและปัสสาวะด้วย diacetyl monooxime

วิธีการของกลุ่มนี้ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยา Fearon ซึ่งเกิดขึ้นในสองขั้นตอน ขั้นตอนแรกคือการไฮโดรไลซิสของ diacetyl monooxime เพื่อสร้าง diacetyl และ hydroxylamine ในขั้นตอนที่สอง ไฮดรอกซิลามีนทำปฏิกิริยากับยูเรียเพื่อสร้างอนุพันธ์ไดอะซีนที่มีสี สำหรับการเกิดออกซิเดชันของไฮดรอกซีลามีนสามารถใช้สิ่งต่อไปนี้: โซเดียมเปอร์ซัลเฟต, กรดสารหนู, กรดเปอร์คลอริก, ฟีนาโซน, ไพเพอร์ เพื่อเพิ่มความเข้มข้นของสีและความคงตัวของสีจึงมีการใช้สิ่งต่อไปนี้: ไธโอเซมิคาร์บาไซด์, กรดฟีนิลแลนทรานิลิก, กลูคูโรโนแลคโตน, แคตไอออน, ทริปโตเฟน, ไนไตรต์

การหาปริมาณยูเรียโดยวิธียูรีเอส

วิธีการใช้เอนไซม์จะขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสของยูเรียด้วยยูเรียในตัวกลางบ่มที่มีค่า pH=6.0-6.5 (บัฟเฟอร์ EDTA) หรือ pH=6.9-7.0 (บัฟเฟอร์ฟอสเฟต) ไปเป็นคาร์บอนไดออกไซด์และแอมโมเนีย แอมโมเนียที่ได้สามารถกำหนดได้จากปฏิกิริยาที่มีความไวสูงและจำเพาะกับฟีนอลไฮโปคลอไรต์และตัวเร่งปฏิกิริยาไนโตรปรัสไซด์ โดยปฏิกิริยาซาลิไซเลต-ไฮโปคลอไรต์ โดยปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ของ Nessler (มีความไวน้อยกว่า 10 เท่าเมื่อเทียบกับฟีนอลไฮโปคลอไรต์ มีความจำเพาะต่ำ) โดยปฏิกิริยาไดคลอโรไอโซไซยานูเรต (การมีโปรตีนรบกวนการกำหนด)

ค่าปกติ

หากจำเป็นต้องเปรียบเทียบความเข้มข้นของไนโตรเจนที่ตกค้างกับปริมาณไนโตรเจนของยูเรีย ความเข้มข้นของไนโตรเจนหลังควรหารด้วย 2.14

ปัจจัยที่มีอิทธิพล

• ในร่างกาย:เพิ่มขึ้น - ยาพิษต่อไต, คอร์ติโคสเตียรอยด์, ไทรอกซีนส่วนเกิน; ลดลง - เพิ่มความเข้มข้นของฮอร์โมนโซมาโตโทรปิก
• ในหลอดทดลอง:ลด (วิธียูเรีย) - โซเดียมซิเตรต

คุณค่าทางคลินิกและการวินิจฉัย

เซรั่ม

ระดับยูเรียที่เพิ่มขึ้นอาจเกิดขึ้นได้จากการทำงานของไตบกพร่อง (โรคเฉียบพลันและเรื้อรัง การอุดตันของทางเดินปัสสาวะ) การไหลเวียนของเลือดในไตบกพร่อง (ภาวะหัวใจล้มเหลว) น้ำในร่างกายลดลง (อาเจียน ท้องร่วง ขับปัสสาวะหรือเหงื่อออกเพิ่มขึ้น) การเร่งปฏิกิริยาของโปรตีนเพิ่มขึ้น (กล้ามเนื้อหัวใจตายเฉียบพลัน กล้ามเนื้อหัวใจตาย ความเครียด แผลไหม้ ตับลีบเหลือง เลือดออกในทางเดินอาหาร) โดยรับประทานอาหารที่มีโปรตีนสูง ในกรณีที่ร้ายแรงของภาวะไตวายเฉียบพลัน ตรวจพบระดับยูเรียเพิ่มขึ้น 10 เท่า เนื่องจากการทำงานของไตขับน้ำกลับคืนเร็วกว่าความสามารถในการมีสมาธิ การขับยูเรียในปัสสาวะตามปกติจึงเกิดขึ้นช้ากว่าการฟื้นฟูการขับปัสสาวะมาก

การลดลงเกิดขึ้นจากการรับประทานอาหารที่มีโปรตีนต่ำโดยมีการใช้โปรตีนเพิ่มขึ้นในเนื้อเยื่อ (การตั้งครรภ์ช่วงปลาย) โรคตับที่รุนแรงพร้อมกับการสังเคราะห์ยูเรียที่บกพร่อง (โรคดีซ่านในเนื้อเยื่อ, โรคตับแข็งในตับ)

ปัสสาวะ

การเพิ่มขึ้นของปริมาณยูเรียในปัสสาวะมีความเกี่ยวข้องกับภาวะต่อมไทรอยด์ทำงานเกิน, โรคโลหิตจางที่เป็นอันตราย, ไข้, พิษฟอสฟอรัส, สังเกตจากการรับประทานอาหารที่มีโปรตีนสูงและในช่วงหลังการผ่าตัด

การลดลงนี้สังเกตได้ในผู้ป่วยที่เป็นโรคไตอักเสบและโรคไตอื่นๆ ยูเรเมีย โรคดีซ่านในเนื้อเยื่อ โรคตับแข็ง หรือโรคตับเสื่อม รวมถึงในเด็กที่กำลังเติบโตอย่างมีสุขภาพดีและอาหารที่มีโปรตีนต่ำ

หลักการของวิธีการ : ยูเรียภายใต้การกระทำของเอนไซม์ยูรีเอสจะสลายตัวเป็น CO 2 และ NH 3 ส่วนหลังเมื่อทำปฏิกิริยากับโซเดียมซาลิไซเลตและโซเดียมไฮโปคลอไรด์ต่อหน้าโซเดียมไนโตรปรัสไซด์ทำให้เกิดผลิตภัณฑ์ที่มีสีความเข้มของสีซึ่งเป็นสัดส่วนกับ ความเข้มข้นของยูเรียในตัวอย่าง

รีเอเจนต์และอุปกรณ์: 1) รีเอเจนต์ 1 – สารละลายยูรีเอสในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต สารละลายโซเดียมซาลิไซเลตและโซเดียมไนโตรปรัสไซด์ 2) รีเอเจนต์ 2 – สารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์และโซเดียมไฮดรอกไซด์ 3) ตัวอย่างซีรั่มในเลือด; 4) สารละลายสอบเทียบยูเรียที่มีความเข้มข้น 5.0 มิลลิโมล/ลิตร; 5) หลอดทดลอง ปิเปต 6) เทอร์โมสตัท; 7) กฟผ.

ความคืบหน้า:

ผสมตัวอย่างและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 37 0 C จากนั้นเติม:

หลังจากเติมรีเอเจนต์แล้ว ให้ผสม 2 ตัวอย่างแล้วบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 37 0 C

วัดความหนาแน่นเชิงแสงของตัวอย่างทดลอง (D) และตัวอย่างการสอบเทียบ (D c) เทียบกับตัวอย่างควบคุมที่ แล = 610 นาโนเมตร สีจะคงตัวนาน 2 ชั่วโมง

ผลลัพธ์: D 1 =

ในการคำนวณความเข้มข้นของยูเรีย ให้ใช้สูตร:

C = D 1 / D k x 5.0 (มิลลิโมล/ลิตร)

C 2 = ปกติ: 2.5 – 8.3 มิลลิโมล/ลิตร

ข้อสรุป:

การหาปริมาณยูเรียในปัสสาวะโดยปฏิกิริยาสีกับพาราดิเมทิลอะมิโนเบนซาลดีไฮด์

หลักการของวิธีการ : ยูเรียซึ่งมีปฏิกิริยากับพาราดิเมทิลอะมิโนเบนซาลดีไฮด์ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดทำให้เกิดสารประกอบสีเหลืองเขียว ความเข้มของสีเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของยูเรียในตัวอย่าง ความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายถูกกำหนดโดยโฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์ริเมทรี

รีเอเจนต์และอุปกรณ์: 1) สารละลายน้ำ 2% ของพาราดิเมทิลอะมิโนเบนซาลดีไฮด์ (pDAB), 2) ตัวอย่างปัสสาวะ, 3) หลอดทดลอง, 4) ปิเปต, 5) FEC

ความคืบหน้า: ปัสสาวะ 0.5 มล. (เจือจางก่อนหน้านี้ 100 ครั้ง) เติม pDAB ที่เป็นน้ำ 2.5 มล. แล้วผสมให้เข้ากัน หลังจากผ่านไป 15 นาที ให้หาความหนาแน่นของแสงของสารละลายบน FEC โดยใช้ตัวกรองสีน้ำเงิน (=400 นาโนเมตร) และคิวเวตที่มีระยะการทำงาน 10 มม. เป็นสารละลายอ้างอิง ให้ใช้ส่วนควบคุมที่มีน้ำ 0.5 มล. และสารละลาย pDAB ที่มีน้ำ 2% 2.5 มล. กำหนดปริมาณยูเรียของตัวอย่าง (มก./มล.) โดยใช้กราฟการสอบเทียบ คำนวณปริมาณยูเรียในปัสสาวะเข้า

มิลลิโมล/วัน

ผลลัพธ์: D 1 = C 1 = มก./มล

D 2 = C 2 = มก./มล

สูตร: S.V. 1.5 16.6 = (มิลลิโมล/วัน)

โดยที่ C คือความเข้มข้นของยูเรีย มก./มล

(ตามแผนภูมิการสอบเทียบ)

B – เจือจางปัสสาวะ (100 ครั้ง)

1.5 - การขับปัสสาวะเฉลี่ยรายวัน (l)

16.6 – ปัจจัยการแปลงในหน่วย SI