Արյան շիճուկում միզանյութի որոշման մեթոդներ. Միզանյութի որոշման կլինիկական նշանակությունը. Արյան շիճուկում և մեզի մեջ միզանյութի որոշում դիացետիլ մոնօքսիմով

Գազոմետրիկ մեթոդներ

Հետազոտության մեկ այլ անվանում է միզանյութի կոնցենտրացիայի հիպոբրոմիտային անալիզը: Մեթոդի գաղափարը հիպոբրոմի միջոցով օքսիդացման ռեակցիայի և միզանյութի տարրալուծման օգտագործումն է: Ռեակցիայի արդյունքում առաջանում է ազոտ և ածխաթթու գազ։ Վերջին բաղադրիչը վերացվում է հատուկ լուծույթով, որից հետո հաշվարկվում է ազոտի քանակը։

Ուրայի պարունակությունը որոշելու մեթոդների հիմնական խմբերը բաժանվում են.

1. XanthhydrolsՀետերոցիկլիկ սպիրտ քսանթհիդրոլը փոխազդում է միզանյութի հետ՝ առաջացնելով չլուծվող դիքսանտիլուրա, որը հետագայում որոշվում է ծանրաչափական, նեֆելոմետրիկ, գունամետրիկ կամ տիտրաչափական եղանակով: Մեթոդները ճշգրիտ են, բայց աշխատատար:
2. Հիպոքլորիտ -Բ.Ա. Ռաշկովանի մեթոդը, որը բաղկացած է միզանյութի նատրիումի հիպոքլորիտի և ֆենոլի փոխազդեցության ժամանակ բնորոշ գույնի տեսքից, գործնականում չի օգտագործվում փորձարարական և հսկիչ նմուշների տարբեր երանգների և HCl-ի ավելացման ժամանակ պղտորության հաճախակի տեսքի պատճառով: .
3. Դիացետիլ մոնօքսիմՄեթոդները հիմնված են Ֆիրոնի ռեակցիայի վրա՝ միզանյութի և դիացետիլ մոնոքսիմի փոխազդեցությունը գունավոր արտադրանքի ձևավորման հետ, դրանք բնութագրվում են լավ վերարտադրելիությամբ, բարձր զգայունությամբ և բարձր սպեցիֆիկությամբ։
4. Կիսաքանակական մեթոդներ՝ օգտագործելով ցուցիչ թուղթ:
5. Օգտագործման մեթոդներ իոնային ընտրողական էլեկտրոդներ.
6. Ֆերմենտային մեթոդները հիմնված են ուրեազի միջոցով միզանյութի հիդրոլիզի վրա (օպտիմալ pH 6,0-8,0): Ստացված ամոնիակը որոշվում է տարբեր ռեակցիաների միջոցով (ֆենոլի հիպոքլորիտ, գլյուտամատ դեհիդրոգենազ, սալիցիլատ-հիպոքլորիտ):
7. Գազոմետրիկ(հիպոբրոմիտ), հիմնված ալկալային միջավայրում նատրիումի հիպոբրոմիտով միզանյութի օքսիդացման և տարրալուծման վրա.

CO 2 (NH 2) + 3NaBrO → N 2 + CO 2 + 3NaBr + H 2 O

Ազատված ածխաթթու գազը ներծծվում է լուծույթով, ազատ է մնում միայն ազոտից, որի ծավալը չափվում է։ Մեթոդը ոչ սպեցիֆիկ է (քանի որ հիպոբրոմիտը փոխազդում է ոչ միայն միզանյութի, այլև ամին խմբեր պարունակող այլ նյութերի հետ), ոչ ճշգրիտ, վատ վերարտադրելի և աշխատատար:

Ինչպես միասնականՀաստատվել են միզանյութի որոշման մեթոդները՝ ֆենոլի հիպոքլորիտ, դիացետիլ մոնոքսիմ և ուրեազի մեթոդներ, ինչպես նաև էքսպրես մեթոդ՝ օգտագործելով Ureest ցուցիչ թուղթ:

Արյան շիճուկում և մեզի մեջ միզանյութի որոշում դիացետիլ մոնօքսիմով

Այս խմբի մեթոդները հիմնված են Ֆեարոնի ռեակցիայի վրա, որը տեղի է ունենում երկու փուլով. Առաջին քայլը դիացետիլ մոնօքսիմի հիդրոլիզն է՝ դիացետիլ և հիդրօքսիլամինի ձևավորման համար։ Երկրորդ քայլում հիդրօքսիլամինը փոխազդում է միզանյութի հետ՝ ձևավորելով գունավոր դիազինի ածանցյալ։ Հիդրօքսիլամինի օքսիդացման համար կարող են օգտագործվել՝ նատրիումի պերսուլֆատ, մկնդեղի թթու, պերքլորաթթու, ֆենազոն, կատիոններ։ Գույնը և դրա կայունությունը ուժեղացնելու համար օգտագործվում են թիոսեմիկարբազիդ, ֆենիլանտրանիլաթթու, գլյուկուրոնոլակտոն, կատիոններ, տրիպտոֆան, նիտրիտներ։

Միզանյութի որոշում ուրեազի մեթոդով

Ֆերմենտային մեթոդները հիմնված են urea-ի հիդրոլիզի վրա ինկուբացիոն միջավայրում pH = 6,0-6,5 (EDTA բուֆեր) կամ pH = 6,9-7,0 (ֆոսֆատային բուֆեր) ածխածնի երկօքսիդի և ամոնիակի մեջ: Ստացված ամոնիակը կարող է որոշվել ֆենոլի հիպոքլորիտի և կատալիզատորի նիտրոպրուսիդի հետ բարձր զգայուն և սպեցիֆիկ ռեակցիայի միջոցով, սալիցիլատ-հիպոքլորիտի ռեակցիայի միջոցով, Նեսլերի ռեագենտի հետ ռեակցիայի միջոցով (այն 10 անգամ ավելի քիչ զգայուն է ֆենոլի հիպոքլորիտի համեմատ, ցածր սպեցիֆիկությամբ), դիքլորիզոցիանուրատ ռեակցիայի միջոցով (սպիտակուցի առկայությունը խանգարում է որոշմանը):

Նորմալ արժեքներ

Եթե ​​անհրաժեշտ է համեմատել մնացորդային ազոտի կոնցենտրացիան միզանյութի ազոտի պարունակության հետ, ապա վերջինիս կոնցենտրացիան պետք է բաժանել 2,14-ի։

Ազդող գործոններ

• in vivo. ավելացում - նեֆրոտոքսիկ դեղամիջոցներ, կորտիկոստերոիդներ, թիրոքսինի ավելցուկ; նվազում - սոմատոտրոպ հորմոնի կոնցենտրացիայի ավելացում,
• in vitro՝ նվազեցում (ուրեազի մեթոդ) – նատրիումի ցիտրատ:

Կլինիկական և ախտորոշիչ արժեք

Շիճուկ

Միզանյութի մակարդակը կախված է լյարդում դրա սինթեզի և երիկամների միջոցով արտազատման արագությունից, ինչպես նաև սպիտակուցի կատաբոլիզմի քանակից։

Միզանյութի մակարդակի բարձրացում կարող է առաջանալ երիկամների ֆունկցիայի խանգարմամբ (սուր և քրոնիկական հիվանդություններ, միզուղիների խանգարում), երիկամային պերֆուզիայի խանգարում (սրտի անբավարարություն), մարմնի ջրի սպառում (փսխում, փորլուծություն, դիուրեզի կամ քրտնարտադրություն), սպիտակուցային կատաբոլիզմի ավելացում (սրտամկանի սուր): ինֆարկտ, սթրես, այրվածքներ, դեղին լյարդի ատրոֆիա, ստամոքս-աղիքային արյունահոսություն), բարձր սպիտակուցային սննդակարգով. Երիկամային սուր անբավարարության ծանր դեպքերում հայտնաբերվել է միզանյութի մակարդակի 10 անգամ աճ: Քանի որ երիկամների ջրի արտազատման գործառույթը վերականգնվում է ավելի արագ, քան կոնցենտրացիայի ունակությունը, մեզի մեջ միզանյութի նորմալ արտազատումը տեղի է ունենում շատ ավելի ուշ, քան դիուրեզի վերականգնումը:

Նվազում է նկատվում ցածր սպիտակուցային սննդակարգով, հյուսվածքներում սպիտակուցների օգտագործման ավելացմամբ (ուշ հղիություն), լյարդի ծանր հիվանդություններով, որոնք ուղեկցվում են միզանյութի սինթեզի խանգարմամբ (պարենխիմային դեղնախտ, լյարդի ցիռոզ):

մեզի

Մեզի մեջ միզանյութի քանակի ավելացումը կապված է հիպերթիրեոզի, վնասակար անեմիայի, ջերմության, ֆոսֆորի թունավորման հետ, որը նկատվում է բարձր սպիտակուցային սննդակարգով և հետվիրահատական ​​շրջանում:

Նվազումը նկատվում է նեֆրիտով և երիկամների այլ հիվանդություններով, ուրեմիայով, պարենխիմային դեղնախտով, ցիռոզով կամ լյարդի դիստրոֆիայով հիվանդների մոտ, ինչպես նաև առողջ աճող երեխաների մոտ և ցածր սպիտակուցային սննդակարգով:

Միզանյութ(հայտնի է նաև որպես միզանյութ) օրգանական միացություն է, որն ունի CO(NH 2) 2 (կարբոնաթթվի դիամիդ) բանաձևը։ Միզանյութի ազոտը կազմում է արտազատվող ընդհանուր ազոտի մոտ 90%-ը։

Ուրայի պարունակության որոշման մեթոդներ

Ուրայի պարունակությունը որոշելու մեթոդների հիմնական խմբերը բաժանվում են.

• Քսանթհիդրոլներ. Հետերոցիկլիկ սպիրտ xanthhydrol-ը փոխազդում է միզանյութի հետ՝ ձևավորելով չլուծվող դիքսանտիլուրա, որը հետագայում որոշվում է ծանրաչափական, նեֆելոմետրիկ, գունամետրիկ կամ տիտրաչափական եղանակով: Մեթոդները ճշգրիտ են, բայց աշխատատար:
• Հիպոքլորիտ - Բ.Ա. Ռաշկովանի մեթոդը, որը բաղկացած է բնորոշ գույնի տեսքից, երբ միզանյութը փոխազդում է նատրիումի հիպոքլորիտի և ֆենոլի հետ, գործնականում չի օգտագործվում փորձարարական և հսկիչ նմուշների տարբեր երանգի և HCl ավելացնելիս պղտորության հաճախակի տեսքի պատճառով:
• Դիացետիլ մոնօքսիմի մեթոդները հիմնված են Ֆիրոնի ռեակցիայի վրա.
• Կիսաքանակական մեթոդներ՝ օգտագործելով ցուցիչ թուղթ:
• Իոն-սելեկտիվ էլեկտրոդների օգտագործմամբ մեթոդներ.
• Ֆերմենտային մեթոդները հիմնված են ուրեազի միջոցով միզանյութի հիդրոլիզի վրա (օպտիմալ pH 6,0-8,0): Ստացված ամոնիակը որոշվում է տարբեր ռեակցիաների միջոցով (ֆենոլ հիպոքլորիտ, գլյուտամատ դեհիդրոգենազ, սալիցիլատ-հիպոքլորիտ):
• Գազոմետրիկ (հիպոբրոմիտ), հիմնված ալկալային միջավայրում նատրիումի հիպոբրոմիտով միզանյութի օքսիդացման և տարրալուծման վրա.

CO 2 (NH 2) + 3NaBrO → N 2 + CO 2 + 3NaBr + H 2 O

Ազատված ածխաթթու գազը ներծծվում է լուծույթով, ազատ է մնում միայն ազոտից, որի ծավալը չափվում է։ Մեթոդը ոչ սպեցիֆիկ է (քանի որ հիպոբրոմիտը փոխազդում է ոչ միայն միզանյութի, այլև ամին խմբեր պարունակող այլ նյութերի հետ), ոչ ճշգրիտ, վատ վերարտադրելի և աշխատատար:

Ֆենոլի հիպոքլորիտի, դիացետիլ մոնօքսիմի և ուրեազի մեթոդները, ինչպես նաև Ureatest ցուցիչ թղթի օգտագործմամբ էքսպրես մեթոդը հաստատվել են որպես միզանյութի որոշման միասնական մեթոդներ։

Արյան շիճուկում և մեզի մեջ միզանյութի որոշում դիացետիլ մոնօքսիմով

Այս խմբի մեթոդները հիմնված են Ֆեարոնի ռեակցիայի վրա, որը տեղի է ունենում երկու փուլով. Առաջին քայլը դիացետիլ մոնօքսիմի հիդրոլիզն է՝ դիացետիլ և հիդրօքսիլամինի ձևավորման համար։ Երկրորդ քայլում հիդրօքսիլամինը փոխազդում է միզանյութի հետ՝ ձևավորելով գունավոր դիազինի ածանցյալ: Հիդրօքսիլամինի օքսիդացման համար կարող են օգտագործվել՝ նատրիումի պերսուլֆատ, մկնդեղի թթու, պերքլորաթթու, ֆենազոն, կատիոններ։ Գույնը և դրա կայունությունը ուժեղացնելու համար օգտագործվում են թիոսեմիկարբազիդ, ֆենիլանտրանիլաթթու, գլյուկուրոնոլակտոն, կատիոններ, տրիպտոֆան, նիտրիտներ։

Միզանյութի որոշում ուրեազի մեթոդով

Ֆերմենտային մեթոդները հիմնված են ուրեազի հիդրոլիզի վրա ինկուբացիոն միջավայրում pH=6.0-6.5 (EDTA բուֆեր) կամ pH=6.9-7.0 (ֆոսֆատային բուֆեր) ածխածնի երկօքսիդի և ամոնիակի մեջ: Ստացված ամոնիակը կարող է որոշվել ֆենոլի հիպոքլորիտի և կատալիզատորի նիտրրոպուսիդի հետ բարձր զգայուն և սպեցիֆիկ ռեակցիայի միջոցով, սալիցիլատ-հիպոքլորիտի ռեակցիայի միջոցով, Նեսլերի ռեագենտի հետ ռեակցիայի միջոցով (այն 10 անգամ ավելի քիչ զգայուն է ֆենոլի հիպոքլորիտի համեմատ, ցածր սպեցիֆիկությամբ), դիքլորիզոցիանուրատ ռեակցիայի միջոցով (սպիտակուցի առկայությունը խանգարում է որոշմանը):

Նորմալ արժեքներ

Եթե ​​անհրաժեշտ է համեմատել մնացորդային ազոտի կոնցենտրացիան միզանյութի ազոտի պարունակության հետ, ապա վերջինիս կոնցենտրացիան պետք է բաժանել 2,14-ի։

Ազդող գործոններ

• in vivo:ավելացում - նեֆրոտոքսիկ դեղամիջոցներ, կորտիկոստերոիդներ, թիրոքսինի ավելցուկ; նվազում - սոմատոտրոպ հորմոնի կոնցենտրացիայի ավելացում;
• արհեստական ​​պայմաններում:նվազեցում (ուրեազի մեթոդ) - նատրիումի ցիտրատ:

Կլինիկական և ախտորոշիչ արժեքը

Շիճուկ

Միզանյութի մակարդակի բարձրացում կարող է առաջանալ երիկամների ֆունկցիայի խանգարմամբ (սուր և քրոնիկական հիվանդություններ, միզուղիների խանգարում), երիկամային պերֆուզիայի խանգարում (սրտի անբավարարություն), մարմնի ջրի սպառում (փսխում, փորլուծություն, դիուրեզի կամ քրտնարտադրություն), սպիտակուցային կատաբոլիզմի ավելացում (սրտամկանի սուր): ինֆարկտ, սթրես, այրվածքներ, դեղին լյարդի ատրոֆիա, ստամոքս-աղիքային արյունահոսություն), բարձր սպիտակուցային սննդակարգով. Երիկամային սուր անբավարարության ծանր դեպքերում հայտնաբերվել է միզանյութի մակարդակի 10 անգամ աճ: Քանի որ երիկամների ջրի արտազատման գործառույթը վերականգնվում է ավելի արագ, քան կոնցենտրացիայի ունակությունը, մեզի մեջ միզանյութի նորմալ արտազատումը տեղի է ունենում շատ ավելի ուշ, քան դիուրեզի վերականգնումը:

Նվազում է նկատվում ցածր սպիտակուցային սննդակարգով, հյուսվածքներում սպիտակուցների օգտագործման ավելացմամբ (ուշ հղիություն), լյարդի ծանր հիվանդություններով, որոնք ուղեկցվում են միզանյութի սինթեզի խանգարմամբ (պարենխիմային դեղնախտ, լյարդի ցիռոզ):

մեզի

Մեզի մեջ միզանյութի քանակի ավելացումը կապված է հիպերթիրեոզի, վնասակար անեմիայի, ջերմության, ֆոսֆորի թունավորման հետ, որը նկատվում է բարձր սպիտակուցային սննդակարգով և հետվիրահատական ​​շրջանում:

Նվազումը նկատվում է նեֆրիտով և երիկամների այլ հիվանդություններով, ուրեմիայով, պարենխիմային դեղնախտով, ցիռոզով կամ լյարդի դիստրոֆիայով հիվանդների մոտ, ինչպես նաև առողջ աճող երեխաների մոտ և ցածր սպիտակուցային սննդակարգով:

Մեթոդի սկզբունքը : միզանյութը ուրեազի ազդեցությամբ քայքայվում է CO 2-ի և NH 3-ի, վերջինս նատրիումի սալիցիլատի և նատրիումի հիպոքլորիդի հետ ռեակցիայի մեջ նատրիումի նիտրոպրուսիդի առկայության դեպքում ձևավորում է գունավոր արտադրանք, որի գույնի ինտենսիվությունը համաչափ է նմուշում միզանյութի կոնցենտրացիան:

Ռեակտիվներ և սարքավորումներ. 1) ռեագենտ 1 – ուրեազային լուծույթ ֆոսֆատային բուֆերում. նատրիումի սալիցիլատի և նատրիումի նիտրոպրուսիդի լուծույթ; 2) ռեագենտ 2 – նատրիումի հիպոքլորիտի և նատրիումի հիդրօքսիդի լուծույթ. 3) արյան շիճուկի նմուշներ. 4) միզանյութի տրամաչափման լուծույթ 5,0 մմոլ/լ կոնցենտրացիայով. 5) փորձանոթներ, պիպետներ. 6) թերմոստատ; 7) ՖԵԿ.

Առաջընթաց:

Նմուշները խառնել և 5 րոպե ինկուբացնել 37 0 C ջերմաստիճանում, ապա ավելացնել.

Ռեակտիվն ավելացնելուց հետո խառնել 2 նմուշ և ինկուբացնել 5 րոպե 37 0 C ջերմաստիճանում։

Չափել փորձնական (D) և տրամաչափման (D c) նմուշների օպտիկական խտությունը հսկիչ նմուշի նկատմամբ λ = 610 նմ: Գույնը կայուն է 2 ժամ։

Արդյունքները՝ D 1 =

Ուրայի կոնցենտրացիան հաշվարկելու համար օգտագործեք բանաձևը.

C = D 1 / D k x 5.0 (մմոլ/լ)

C 2 = Նորմալ՝ 2,5 – 8,3 մմոլ/լ

Եզրակացություններ.

Մեզի մեջ միզանյութի քանակական որոշումը պարադիմեթիլամինոբենզալդեհիդով գունավոր ռեակցիայի միջոցով

Մեթոդի սկզբունքը : միզանյութը, թթվային միջավայրում փոխազդելով պարադիմեթիլամինոբենզալդեհիդի հետ, առաջացնում է դեղնականաչավուն գունավոր միացություն։ Գույնի ինտենսիվությունը համաչափ է նմուշում միզանյութի կոնցենտրացիայի հետ: Լուծույթի օպտիկական խտությունը որոշվում է ֆոտոէլեկտրոկոլորիմետրիայով։

Ռեակտիվներ և սարքավորումներ: 1) պարադիմեթիլամինոբենզալդեհիդի 2% ջրային լուծույթ (pDAB), 2) մեզի նմուշներ, 3) փորձանոթներ, 4) պիպետներ, 5) FEC.

Առաջընթաց: 0,5 մլ մեզի (նախկինում 100 անգամ նոսրացված) ավելացնել 2,5 մլ pDAB 2% ջրային լուծույթ և մանրակրկիտ խառնել: 15 րոպե անց որոշեք լուծույթի օպտիկական խտությունը FEC-ի վրա՝ օգտագործելով կապույտ ֆիլտր (=400 նմ) ​​և 10 մմ աշխատանքային հեռավորություն ունեցող կուվետներ։ Որպես տեղեկատու լուծույթ, օգտագործեք կոնտրոլ, որը պարունակում է 0,5 մլ ջուր և 2,5 մլ pDAB-ի 2% ջրային լուծույթ: Որոշեք նմուշի միզանյութի պարունակությունը (մգ/մլ)՝ օգտագործելով տրամաչափման գրաֆիկը: Հաշվեք մեզի մեջ միզանյութի պարունակությունը

մմոլ/օր.

Արդյունքները՝ D 1 = C 1 = մգ/մլ

D 2 = C 2 = մգ / մլ

Բանաձև՝ S.V. 1.5. 16.6 = (մմոլ/օր)

որտեղ C-ը միզանյութի մգ/մլ կոնցենտրացիան է

(ըստ տրամաչափման աղյուսակի)

B – մեզի նոսրացում (100 անգամ)

1,5 - միջին օրական դիուրեզ (լ)

16.6 – փոխակերպման գործակիցը SI միավորներով